洋蔥伯克霍爾德菌群容易存活在水系統(tǒng)以及液體產(chǎn)品中，且能在有強(qiáng)抑菌性的產(chǎn)品中生長(zhǎng)繁殖，可能增加用藥人群感染和致病風(fēng)險(xiǎn)，目前美國(guó)藥典將其列為吸入劑、水溶性口服制劑等制劑中不可檢出的微生物，如果產(chǎn)品中檢出該微生物，可直接將其作為不可接受微生物。
接下來(lái)我們分別介紹一下“不可接受微生物”和“洋蔥伯克霍爾德菌群”。
一、不可接受微生物
《中國(guó)藥典》（2020版）1107中明確規(guī)定了：“本限度標(biāo)準(zhǔn)所列的控制菌對(duì)于控制某些藥品的微生物質(zhì)量可能并不全面，因此，對(duì)于原料、輔料及某些特定的制劑，根據(jù)原輔料及其制劑的特性和用途、制劑的生產(chǎn)工藝等因素，可能還需檢查其他具有潛在危害的微生物。”USP和EP中也提到“For a given preparation it may be necessary to test for other?microorganisms depending on the nature of the starting materials?and the manufacturing process.”
在非無(wú)菌藥品的微生物控制中，其他具有潛在危害的微生物也需要加以關(guān)注，這些微生物也有可能在微生物計(jì)數(shù)或某項(xiàng)控制菌檢驗(yàn)過(guò)程中被發(fā)現(xiàn)?！吨袊?guó)藥典》和美國(guó)的聯(lián)邦法規(guī)21CFR均提到了非藥典規(guī)定的控制菌，其中有致病菌或條件致病菌，如果非無(wú)菌藥品中存在足夠的數(shù)量，通過(guò)用藥途徑可能對(duì)患者的健康產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險(xiǎn)，則這類微生物叫做不可接受微生物（Objectionable microorganisms）。
而正是洋蔥伯克霍爾德菌的出現(xiàn)促使了“不可接受微生物”概念的誕生。
二、洋蔥伯克霍爾德菌群
洋蔥伯克霍爾德菌群（Burkholderia cepacia Complex，Bcc）隸屬于伯克霍爾德菌屬，該屬共有122個(gè)種，將其中表型近似、基因型存在差異的菌種進(jìn)行劃分，命名為洋蔥伯克霍爾德菌群（Bcc），截止至2021年，已被分類命名的Bcc成員達(dá)到24個(gè)種。Bcc作為條件致病菌，能引起多種醫(yī)院感染，引起敗血癥、心內(nèi)膜炎、肺炎、傷口感染和膿腫等，且該菌在患者和患者之間具有較強(qiáng)的傳播能力，由于其多重耐藥特性，治療相當(dāng)困難。
? ? ? 洋蔥伯克霍爾德菌（Burkholderia cepacia，B.c）于1947年由康奈爾大學(xué)教授從洋蔥根部分離出來(lái)，可引起洋蔥根莖腐爛，最初被命名為洋蔥假單胞菌。隨著分子生物學(xué)鑒定技術(shù)的發(fā)展，1992 年該菌被重新分類命名為洋蔥伯克霍爾德菌，洋蔥伯克霍爾德菌（B.c）是一種廣泛存在于水、土壤、植物和人體中的革蘭氏陰性桿菌，革蘭氏染色結(jié)果見(jiàn)圖1。
圖1?洋蔥伯克霍爾德菌CMCC(B)23005染色鏡檢圖片
三、洋蔥伯克霍爾德菌群的檢驗(yàn)
? ?在各領(lǐng)域現(xiàn)行的標(biāo)準(zhǔn)體系中，洋蔥伯克霍爾德菌/群的檢驗(yàn)方法有3 種：SN/T 4684—2016《進(jìn)出口化妝品中洋蔥伯克霍爾德菌檢驗(yàn)方法》、SN/T 4485—2016《進(jìn)出口口腔清潔類產(chǎn)品中洋蔥伯克霍爾德菌檢驗(yàn)方法》及USP<60>Microbiological examination of nonsterileproducts-test for?Burkholderia cepacia?complex。
? ? ? 2022年11月中國(guó)藥典首次頒布了《洋蔥伯克霍爾德菌群檢查法草案公示稿（第一次）洋蔥伯克霍爾德菌群檢查法》，文本中首次出現(xiàn)了洋蔥伯克霍爾德菌群選擇性瓊脂培養(yǎng)基（BCCSA）。本方法中選擇具有代表性的3株Bcc菌株作為培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)和檢查方法適用性試驗(yàn)的試驗(yàn)菌，分別為洋蔥伯克霍爾德菌（Burkholderia cepacia）〔CMCC（B）23005〕、 新洋蔥伯克霍爾德菌（Burkholderia cenocepacia）〔CMCC（B）23006〕、神秘伯克霍爾德菌（Burkholderia aenigmatica）〔CMCC（B）23010〕。
檢驗(yàn)流程方法如圖2：
圖2?洋蔥伯克霍爾德菌群檢驗(yàn)流程
四、洋蔥伯克霍爾德菌群選擇性瓊脂培養(yǎng)基（BCCSA）
? 胰蛋白胨、酵母提取物提供微生物生長(zhǎng)所需的氮源；多數(shù)Bcc成員都可利用蔗糖和丙酮酸鈉，所以將上述兩種物質(zhì)作為碳源；氯化鈉作為滲透壓穩(wěn)定劑；結(jié)晶紫可抑制革蘭氏陽(yáng)性菌及部分真菌生長(zhǎng)；三種抗生素的添加可有效抑制大部分革蘭氏陽(yáng)性菌及部分革蘭氏陰性菌生長(zhǎng)，由于Bcc的廣譜耐藥性，其可在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好。BCCSA培養(yǎng)基采用酚紅作為指示劑，根據(jù)其變色范圍（低于6.6呈現(xiàn)黃色）將初始pH調(diào)整為6.2±0.2，使得空白平皿呈現(xiàn)黃色，如圖3所示；為了保證在接種Bcc后，當(dāng)菌株代謝產(chǎn)生堿性產(chǎn)物時(shí)，培養(yǎng)基的pH能夠快速升高，并體現(xiàn)在其顏色變化上發(fā)揮指示作用，選擇磷酸二氫鉀作為pH緩沖劑；洋蔥伯克霍爾德菌群在BCCSA培養(yǎng)基上菌落形態(tài)為：菌落呈灰白、灰粉色或土黃（棕）色，周圍培養(yǎng)基由黃色變橘紅或玫紅色。在TSA上Bcc菌落呈亮淡黃色，隆起，邊緣整齊至不規(guī)則。不同洋蔥伯克霍爾德菌在BCCSA和TSA培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)見(jiàn)圖4-圖8。
圖3：洋蔥伯克霍爾德菌群選擇性瓊脂培養(yǎng)基（BCCSA）?空白平皿??
圖4：洋蔥伯克霍爾德菌 Burkholderia cepacia??CMCC(B)23005
圖5：新洋蔥伯克霍爾德菌Burkholderia cenocepacia?CMCC?(B)23006
圖6：神秘伯克霍爾德菌 Burkholderia aenigmatica??CMCC(B)23010
圖7：洋蔥伯克霍爾德菌 Burkholderia cepacia??ATCC 25608
圖8：洋蔥伯克霍爾德菌 Burkholderia cepacia??ATCC 25416
五、標(biāo)準(zhǔn)定量菌株
為了方便使用，我公司推出了《中國(guó)藥典》（2020版）推薦的三株洋蔥伯克霍爾德菌群定量菌株。定量菌株操作便捷，數(shù)量適宜，菌量為102-103CFU/支。具體操作流程見(jiàn)圖9。
圖9：定量菌株操作流程
六、產(chǎn)品信息及列表
洋蔥伯克霍爾德菌群選擇性培養(yǎng)基
洋蔥伯克霍爾德菌群定量菌株
七、參考文獻(xiàn)
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