? ? ? ? 每個檢驗實驗室都應當對自己做出的樣品檢測結果負責，如同每個工廠都會對自己生產的產品負責。工廠會制定各種質控方法和措施去保證產品的各項指標和參數(shù)滿足要求，從而確保產品的品質。實驗室自然也會制定各種質量監(jiān)控方法去保證檢驗結果的準確和可靠。

圖A.1 實驗室質量監(jiān)控流程圖

? ? ? ?上圖為實驗室質量監(jiān)控的流程圖，出自RB/T 038-2020 《食品微生物檢測結果質量監(jiān)控指南》的附錄A，流程圖中涉及的環(huán)節(jié)很多，受篇幅限制，本文重點介紹其中的一個核心環(huán)節(jié)，即評價依據，包括流程圖中的數(shù)據統(tǒng)計分析和結果評價。

對于內部質量監(jiān)控方案應預先設定評價依據，不同評價依據對應不同的測試統(tǒng)計量，并應與所策劃的質量監(jiān)控方式對應。實驗室可自行設定評價依據，包括但不限于：

a)監(jiān)控結果與添加目標微生物的一致性；

b)方法中規(guī)定或實驗室通過方法驗證所獲得的質量指標(如重復性限、再現(xiàn)性限、回收率等);

c)有證標準物質/標準樣品(如有證標準菌株)、標準物質/標準樣品(如標準菌株)或質控樣品的特征值；

d)控制圖的警示限和控制限;

e)公認值，如同一操作者對同一平板重復計數(shù)，其差異應在5%之內，不同操作者對同一平板重復計數(shù)，其差異應在10%之內；

f)實驗室內部的經驗值。

以上是常用的評價依據，除了f項的經驗值外，我們將逐條給大家介紹。

a)監(jiān)控結果與添加目標微生物的一致性

本項適合于定性檢測項目的質量監(jiān)控。通常直接將監(jiān)控結果與指定值進行比較，兩者一致視為“滿意”或“正確”，不一致則視為“不滿意”或“不正確”。比如某實驗室計劃開展沙門氏菌項目的質量監(jiān)控，在一個經檢驗無沙門氏菌的樣品中人工添加了一定量沙門氏菌標準菌，混勻后使樣品中沙門氏菌含量在10-100CFU/25g。將此自制質控樣品讓實驗室進行檢驗，此自制質控樣品的指定值就是陽性，如果實驗室檢驗后報告結果為陽性，那么監(jiān)控結果與指定值一致，視為“滿意”或“正確”；如果實驗室檢驗后報告結果為陰性，那么監(jiān)控結果與指定值不一致，視為“不滿意”或“不正確”。定性檢測項目的評價方式是很直接的，一般不涉及統(tǒng)計量。詳見RB/T 038-2020的7.2.1條。

e)公認值，如同一操作者對同一平板重復計數(shù)，其差異應在5%之內，不同操作者對同一平板重復計數(shù)，其差異應在10%之內；

公認值可以理解為一種行業(yè)內的默認值。條款中的舉例是針對定量項目檢驗流程中平板計數(shù)這一個步驟的監(jiān)控。5%和10%就是公認值，此方法可用于內部人員比對監(jiān)控方式的評價。

評價依據的a和e兩項都比較簡單，我們下面重點介紹b，c，d三項。此三項都用于定量檢測項目。

b)方法中規(guī)定或實驗室通過方法驗證所獲得的質量指標(如重復性限、再現(xiàn)性限、回收率等);

此項是利用標準方法規(guī)定的質量指標進行統(tǒng)計分析和評價。實際工作中經常利用的指標有三個，分別是重復性限（r）、加標回收率和置信區(qū)間。在ISO標準體系中，此三個指標都明確給出，可以直接利用。但是國標體系中重復性限（r）和加標回收兩個指標在微生物檢測方法中很少提及，所以可以直接參考ISO標準指標或自行通過方法驗證獲得。

b.1)重復性限（r）

以ISO 4833-1-2013《食品鏈微生物學 微生物計數(shù)的水平方法 第1部分：30°C傾注平板菌落計數(shù)》為例，此標準提供的指標是以生奶或巴氏殺菌奶為基質重復性限（r）為0.25（log₁₀）。重復性限（r）是指在同一實驗室，由同一操作人員使用相同的設備，按相同的測試方法，在短時間內對同一被測對象進行的兩次獨立測試結果對數(shù)值之差不得大于0.25（log₁₀）。也就是說，如果以重復性限（r）指標進行菌落總數(shù)的內部質量監(jiān)控，那么第一次實驗結果是1.0×10⁵CFU/g，轉log值后為5（log₁₀），根據重復性限（r）為0.25（log₁₀）的要求，第二次實驗結果應該在5±0.25（log₁₀），即4.75-5.25（log₁₀）之間。轉換為CFU值就是5.6×10⁴-1.8×10⁵CFU/g之間。如果第二次實驗的真實結果落在此范圍內，那么本次內部質量監(jiān)控的結果為“滿意”。詳見RB/T 038-2020的7.2.2.1條。

b.2)加標回收率

此指標在微生物檢測標準中涉及很少，目前只有ISO 9308-1-2014《水質大腸埃希氏菌和大腸菌群計數(shù) 第1部分低背景菌群水的膜過濾法》中有提及，所以本文不再展開詳述。詳見RB/T 038-2020的7.2.2.2條。

b.3)置信區(qū)間

置信區(qū)間指標主要在最可能數(shù)（MPN）計數(shù)法中提及。在再現(xiàn)性條件下，對樣品進行分析所得重復測試結果，如果試驗組結果在對照組結果的95%置信區(qū)間內，則可認為試驗組結果與對照組結果沒有顯著性差異。例如：假設某一對照組人員按照GB4789.3第一法進行大腸菌群測試計數(shù)，陽性管數(shù)為3-2-1，查MPN表得到150 MPN，查MPN表又可知其95%置信區(qū)間的上限為420 MPN,下限為37 MPN，那么另一試驗組人員檢測結果所得MPN值在37~420之間，均可認為試驗組人員的測試結果與對照組人員的測試結果沒有顯著性差異。詳見RB/T 038-2020的7.2.2.3條。

c)有證標準物質/標準樣品(如有證標準菌株)、標準物質/標準樣品(如標準菌株)或質控樣品的特征值；

此項是利用有證標準物質/標準樣品(如有證標準菌株)、標準物質/標準樣品(如標準菌株)或質控樣品的特征值來進行統(tǒng)計分析和評價。其中最推薦的是質控樣品。目前國內常見質控樣品都會提供特性值和特性值區(qū)間。以中國檢科院質控樣為例，證書上會提供以下參數(shù)，包括特性值、標準差和特性值區(qū)間。

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? ? ? ? 如果用此質控樣品進行檢測，只要檢測結果落在特性值區(qū)間內，則視為“滿意”。越接近特性值，說明實驗誤差越小。

質控樣品特性值區(qū)間是根據特性值和標準差，利用區(qū)間估計的公式進行計算而得。公式如下：

式中：

CI----置信區(qū)間；

μ0----平均菌落數(shù)；

S----標準差；

k----包含因子。

? 以上述截圖的質控樣證書為例：大腸埃希氏菌質控樣的平均菌落數(shù)，也就是特性值為3.022（log₁₀CFU/mL）,對應菌落數(shù)為1051 CFU/mL，修約后為1100 CFU/mL，標準差為0.483（log₁₀CFU/mL），此數(shù)值應該是由log值計算出，所以沒有轉換回菌落數(shù)的意義。那么CI=3.022±k×0.483。當k=1時，表示所有測量均值中有68%的值落在2.539 ~3.505（log₁₀CFU/mL）之間；當k=2時，表示所有測量均值中有95%的值落在2.056 ~3.988（log_10?CFU/mL）之間，當k=3時，表示所有測量均值中有99.7%的值落在1.573~4.471（log_10?CFU/mL）之間。本質控樣品選用了k=2, 所有測量均值有95%的值落在2.056 ~3.988（log_10?CFU/mL）之間，即菌落數(shù)為110-9700 CFU/mL。這就是特性值區(qū)間的意義。詳見RB/T 038-2020的7.2.2.4條。

如果質控樣品可以提供擴展測量不確定度，并且檢驗實驗室自身已經計算過自己實驗室該項目的擴展測量不確定度，則可以利用此類質控樣品的信息進行評價。統(tǒng)計量為E_n值。|E_n|≤1，表明測量結果的質量得到保證，無需采取進一步措施；|E_n|>1，表明測量結果的質量失控，宜查找原因并迅速采取糾正措施。由于此統(tǒng)計量使用較少，本文不再展開介紹公式和計算過程。詳見RB/T 038-2020的7.2.2.5條。

目前在國內檢測行業(yè)中將質控樣品直接用于內部質量監(jiān)控的情況最為常見，一般質控樣品也直接提供特性值和特性值區(qū)間，無需檢測實驗室自行計算置信區(qū)間。所以檢測實驗室直接購買質控樣品是最省時省力的內部質量監(jiān)控方式。

d)控制圖的警示限和控制限;

d項是利用控制圖進行統(tǒng)計分析及評價。在室內再現(xiàn)性條件下，食品微生物檢測數(shù)據滿足正態(tài)分布時，可使用控制圖進行質量監(jiān)控。以代表時間或順序抽取的樣品號為橫坐標，以代表質量水平的特征值為縱坐標，繪制控制圖。通常使用單值-移動極差控制圖(X-R_m控制圖)監(jiān)控菌落計數(shù)結果的準確性和精密度，也可用于監(jiān)控MPN法計數(shù)結果。構建單值-移動極差控制圖(X-R_m控制圖)時原則上需要20個以上測試數(shù)據。宜在日常檢測過程中檢測相應的質量監(jiān)控樣品。將質控數(shù)據處理后，按時間順序繪制在建立好的控制圖上。下列任何一種情況是不能接受的，過程可能失控：

a)一個或多個連續(xù)值超出“控制限”;

b)連續(xù)3次觀察中有兩次超過同一“警示限”;

c)連續(xù)9次觀測值在平均值的同一側；

d)連續(xù)6次觀測值穩(wěn)步上升或下降。

一旦識別出失控，應立即進行不符合調查，采取適當?shù)娘L險應對措施。

控制圖適合連續(xù)監(jiān)控，平時使用較少，本文不再展開計算過程，僅展示某次實驗的X-R_m控制圖供大家參考。詳見RB/T 038-2020的7.2.2.7條。

以上就是本文給大家介紹的幾種內部質量監(jiān)控的評價依據，其中a項適合定性項目，e項比較簡單直觀。b、c、d三項是用于定量項目監(jiān)控比較多的評價依據，其中b和c項又各自有幾種不同的評價依據，各位檢測行業(yè)的老師可以根據自己實驗室的實際情況進行選擇。一般情況下，選擇市售合格的質控樣品，直接參考證書給出的特性值和特性值范圍進行評價是最簡單的辦法。

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參考文獻：

1、RB/T 038-2020 食品微生物檢測結果質量監(jiān)控指南

2、ISO 4833-1-2013食品鏈微生物學 微生物計數(shù)的水平方法 第1部分：30°C傾注平板菌落計數(shù)